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ELISA细节盘点
1. 样本收集
每个标本量收集体积=100ulx检测指标,如要做复孔,标本量收集体积=10Oul×检测指标×2。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20°℃或-70°℃条件下保存,避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20°℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。如需离心的样本,离心转速不宜过高(2000~3000)
2. ELISA加样
加样品时,单孔用量要求: ≥50ul/指标,如需要做2个复孔则血量≥100ul/指标。如果样本量不充足,具体用量可咨询您的专属销售。
3. 样品捕获抗体孵育
37C恒温孵育,避免温度变化过大
4. 洗涤
机洗: 将25x×洗涤缓冲液稀释成1×,1×洗涤缓冲液洗三次,每次加300uL浸泡60s手洗:手洗次数应比机洗次数多,浸泡时间也应适当延长
手洗容易导致吸附在酶标板底部的试剂脱落,从而导致结果偏小,手洗次数过多也会影响实验结果,建议机洗
5. 底物显色(TMB显色) 孵育
TMB在使用前应放置室温平衡30分钟,加的量为A、B各50uL
6. ELISA终止液终止反应
加完TMB终止液应让其混匀再在酶标仪上读数
7. 酶标仪读数
在450nm波长处测定O.D值
8. 根据O.D值计算样本浓度
使用软件拟合标准曲线,根据标准曲线的拟合度(r或R2)以及残差平方和(s)选择合适的曲线。
上海双色球有限公司,生命科学和生物医学域十余年,是集研发、生产、销售于一体的专业生物公司。公司目前可以提供多种生物学检测试剂盒、进口常规生化ELISA试剂、抗体、标准品、血清等产品。如果您有实验方面的需求和问题,都可以联系我们,欢迎咨询。