影响ELISA试剂盒灵敏度常出现的问题及解决办法

ELISA试剂盒试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。上海双色球将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结一下，以期给同行带来—些启发，提高试验质量。

1、超过有效期。试剂盒必须在有效期内使用，超过有效期的产品可能会产生很弱的信号。

2、试剂盒没有按规定进行保存，受高温影响。

3、试剂、样品用前未平衡至室温

4、加入试剂的体积和时间有误，移液器计量不准，吸嘴内水分太多或不清洁。

5、洗板及加样过程中，酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力，

6、孵育时间及孵育温度未达到要求，反应板放入培养箱时注意温度并及时调整。

7、洗板次数过多，或浓缩洗液稀释倍数不符合要求，洗涤冲击力太大，浸泡时间太长等，

8、显色剂加量不足或顺序颠倒，或混合后加入。

9、底物作用时间不够，

10、燕馏水水质有问题

ELISA试剂盒灵敏度出现问题相应的解决方法

1、实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期,

2、不要将试剂盒长时间置于常温下，按便用规定储藏。

3、试剂、样品用前平衡至室温

4、确定所使用的试剂体积正确，加入时间适当。校正移液器，移液器与吸晚配合要紧密吻合。移液不宣太快，尽量排放完。

5、确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如爱氮钠等，确认配制洗液的容器已洗千净，确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。

6、孵育温度应控制在37-38C，孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门，以免影响保温。

7、严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板，减小洗涤冲击力，按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数，

8、显色剂滴瓶垂直向下，持力均匀，滴速不宜过快，先加显色剂A，后加显色剂B，不可将A、B液混合。

9、准确定时。

10、测定燕馏水配制试剂对酶免疫法的影响。